DEAE纖維素 DE-52 常用耗材
DEAE纖維素 DE-52 常用耗材產(chǎn)品簡介
DEAE-纖維素，它采用平均粒徑為 50µm 的顆粒型親水高分子聚合物，表面又用大分子糖鏈接枝，使它有更高的比表面積和更好的生物兼容性，它在高流水下保持更高載量，同時又具有更好的分辨率。由于比表面積大，平衡和洗脫的時間也更短。它經(jīng)過接枝即使是純化病毒，質(zhì)粒等超大分子的物質(zhì)，載量基本保持不變。本產(chǎn)品物理和化學穩(wěn)定性好，使用壽命長，操作方便。
注意事項：
1、 色譜柱裝填
（1）所需要用到的材料的溫度要與色譜操作的溫度一樣，液體最好做脫氣處理。填料可直接稱量需要的量用緩沖液溶漲一小時裝柱即可，如果不好溶脹，可適當加熱。
（2）在柱子下端加入20%乙醇，以除去柱子中的空氣，關閉柱子出口，在柱內(nèi)保留少量的20%乙醇。20%乙醇容易產(chǎn)生氣泡，可以在里面加1%吐溫避免氣泡產(chǎn)生。也可以換成純水裝柱子，但是需要把填料中的20%乙醇也換成純水，具體的方法取需要體積的填料在抽濾漏斗上進行，也可以小心傾去填料上的20%乙醇，再換成5倍體積的純水，反復沉淀去上清，5次左右就可以用于裝柱子。
（3）此填料顆粒比較細，所以一定要注意柱子要選擇合適的篩網(wǎng)，不能漏，也可以取點填料加到篩網(wǎng)上試試，如果沒有問題再將填料連續(xù)倒入柱子時，要用玻璃棒的緊靠柱子內(nèi)壁引流，以減少氣泡的產(chǎn)生，讓填料先自然沉降到填料體積不再變化，而填料和上面的液體很好分層，上層溶液澄清，就可以開泵用適當?shù)牧魉賶褐樱盍象w積不再變化后，再把轉(zhuǎn)換頭緊頂在填料上就可以平衡柱子使用。使用的流速要小于裝柱子的流速。
（4）在裝柱子前，填料從冰箱中取出至少要室溫放置2-3個小時，這樣避免裝柱子時由于溫度變化而使柱子中產(chǎn)生氣泡。
2、 蛋白的結(jié)合
樣品的鹽濃度和pH要盡量和平衡柱子的緩沖液一致，鹽濃度過高或者pH帶低也許掛不上，所以要根據(jù)自己的樣品做適當調(diào)整。
3、 蛋白的洗脫
這個填料如果采用線性梯度洗脫，柱子的直徑和高度比最好是大于10，數(shù)值越大越有利于分離，而且樣品最好別上太多，可以按約10mg/ml上樣，如果采用階段洗脫的方法，裝短粗柱子就可以，上樣量也沒有限制。階段洗脫容易放大，重復性好，如果洗脫條件好可以得到和線性梯度一樣或者更好。采用什么方法根據(jù)自己需要。
4、 再生清洗
（1）用完之后用0.1M 醋酸洗5個柱體積，然后用2M NaCl洗5個床體積，再用水洗至中性，然后用20%乙醇保存。
（2）有機溶劑和水混合很容易產(chǎn)生氣泡，為了避免這樣情況，可以把配好的有機溶劑在室溫放置過夜，再使用，這樣可以避免氣泡進柱子而導致柱子不能正常使用。
特別注意：
上樣之前，樣品至少用0.45微米膜過濾，盡量去除色素，否則色素會被吸附到填料上，影響填料的正常使用。
在使用過程中，不能使用強酸強堿，酸和堿的濃度應低于0.15摩爾。
