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上海穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選

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上海穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選穩(wěn)定表達細胞株(穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株)指在細胞中持續(xù)穩(wěn)定表達特定基因或干擾特定基因表達。穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株的目的基因質(zhì)粒DNA整合到細胞染色體上,使細胞*穩(wěn)定表達該基因。

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上海穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選

穩(wěn)定表達細胞株(穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株)指在細胞中持續(xù)穩(wěn)定表達特定基因或干擾特定基因表達。穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株的目的基因質(zhì)粒DNA整合到細胞染色體上,使細胞*穩(wěn)定表達該基因。

穩(wěn)轉(zhuǎn)株長用于基因研究方向,便于*觀察和檢驗基因?qū)τ诩毎δ芤约暗鞍椎南嗷プ饔谩?/span>

一般轉(zhuǎn)染實驗方法:

用轉(zhuǎn)染質(zhì)?;虿《厩秩镜姆椒▽?gòu)建好的含靶基因的載體導(dǎo)入細胞,根據(jù)不同的基因載體中所含的抗性標志選用相應(yīng)的藥物進行篩選混合陽性克隆。在陽性混合克隆的基礎(chǔ)上,得到單細胞長出的陽性單克隆,繼而得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株。

一般篩選方法:

1、轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后,單克隆方法篩選穩(wěn)定細胞系

對大多數(shù)細胞轉(zhuǎn)染效率較低。對于基因過表達,如果轉(zhuǎn)染效率達到40%,基因過表達尚可。但是對于基因干擾實驗,對轉(zhuǎn)染效率要求遠遠高于基因過表達,通常質(zhì)粒轉(zhuǎn)染無法滿足。

另外,質(zhì)粒游離于細胞質(zhì)中,很快降解,無法滿足較長時間的檢測項目;質(zhì)粒轉(zhuǎn)染整合幾率極低,穩(wěn)定細胞株構(gòu)建耗時耗力,且得率很低,往往需要挑取單克隆株。

2、病毒感染篩選穩(wěn)定細胞株

病毒感染方法較質(zhì)粒轉(zhuǎn)染篩選單克隆方法更方便和高效,是目前主流的穩(wěn)定細胞系篩選方法。用慢病毒制備穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株,由于其高效整合、高效轉(zhuǎn)錄、高效表達、宿主范圍廣,感染效率高,且與細胞染色體整合而不發(fā)生基因重排,是制備穩(wěn)定細胞株的理想載體。

 

服務(wù)內(nèi)容: 1、穩(wěn)定:保證15代以內(nèi)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞穩(wěn)定表達。

           2、迅速:一般控制在1個月以內(nèi)完成構(gòu)建。

           3、經(jīng)濟:價格實惠,性價比高。

           4、質(zhì)量保證:對外源基因進行嚴格鑒定。


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