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【儀器網(wǎng) 使用手冊】固相萃取儀是液固萃取柱和液相色譜技術(shù)結(jié)合發(fā)展而來的樣品預(yù)處理技術(shù)，可用于樣品的分離、純化和濃縮，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、環(huán)保等領(lǐng)域。
1.選擇小柱或?yàn)V膜
小柱或?yàn)V膜的大小與規(guī)格應(yīng)視樣品中待測物的濃度大小而定。對于濃度較低的體內(nèi)樣品, 一般應(yīng)選用盡量少的固定相填料萃取較大體積的樣品。
2.活化
萃取前先用充滿小柱的溶劑沖洗小柱或用5-10ml 溶劑沖洗濾膜使填料保持濕潤, 因?yàn)樘盍细稍飼档蜆悠繁Ａ糁担餍≈母稍锍潭炔灰?也會影響回收率的重現(xiàn)性。
3.上樣
一般可采取以下四種方法：
(1) 用0.1mol/L 酸或堿調(diào)節(jié), 使pH<3或pH>9, 離心取上層液萃?。?br />
(2)用甲醇、乙腈等沉淀蛋白質(zhì)后取上清液, 以水或緩沖液稀釋后萃??；
(3)用酸或無機(jī)鹽沉淀蛋白質(zhì)后取上清液, 調(diào)節(jié)pH 值后萃取；
(4)超聲15min后加入水、緩沖液, 取上清液萃取。流速應(yīng)控制為1ml/min, 流速快不利于待測物與固定相結(jié)合。
4.淋洗
反相SPE的清洗溶劑多為水或緩沖液, 可在清洗液中加入少量有機(jī)溶劑、無機(jī)鹽或調(diào)節(jié)pH值。加入小柱的清洗液應(yīng)不超過一個(gè)小柱的容積, 而SPE濾膜為5～10ml。
5.洗脫
應(yīng)選用5～10ml離子強(qiáng)度較弱但能洗下待測物的洗脫溶劑。若需較高靈敏度, 則可先將洗脫液揮干后, 再用流動相重組殘留物后進(jìn)樣。體內(nèi)樣品洗脫后多含有水, 可選用冷凍干燥法。保留能力較弱的SPE 填料可用小體積、較弱的洗脫液洗下待測物,再用極性較強(qiáng)的HPLC 分析柱分析洗脫物。
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