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流式細胞儀的使用注意事項

   2022年07月14日 13:36  
  流式細胞儀是對細胞進行自動分析和分選的裝置。它可以快速測量、存貯、顯示懸浮在液體中的分散細胞的一系列重要的生物物理、生物化學方面的特征參量,并可以根據(jù)預選的參量范圍把想要的細胞亞群從中分選出來。
 
  流式細胞儀主要由流動室和液流系統(tǒng)、激光源和光學系統(tǒng)、光電管和檢測系統(tǒng)、計算機和分析系統(tǒng)四個部分組成,要想很好地應(yīng)用流式細胞分析和分選技術(shù),必需先對儀器進行調(diào)試,使其處于良好的工作狀態(tài),并能正確使用儀器。下面簡要介紹流式細胞儀的調(diào)試項目及要點、使用的程序等等。
 
  調(diào)試和校準
 
  1、激光強度:除調(diào)整反射鏡的角度以調(diào)整到所需波長的激光出光外,還要結(jié)合顯示屏上的光譜曲線使激光的強度輸出為最大。
 
  2、液流速度:可通過操作臺數(shù)字顯示監(jiān)督,調(diào)節(jié) 氣體壓力大小以獲得穩(wěn)定的液流速度。
 
  3、測量區(qū)光路調(diào)節(jié)?。哼@是調(diào)試工作的關(guān)鍵。需要保證在測量區(qū)的液流、激光束、90散射測量光電系統(tǒng)垂直正交,而且交點較小。一般可在用標準熒光微球等校準中完成。
 
  儀器的操作和使用
 
  1、打開電源,對系統(tǒng)進行預熱;
 
  2、打開氣體閾,調(diào)節(jié) 壓力,獲得適宜的液流速度;開啟光源冷卻系統(tǒng);
 
  3、在樣品管中加入去離子水,沖洗液流的噴嘴系統(tǒng);
 
  4、利用校準標準樣品,調(diào)整儀器,使在激光功率、光電倍增管電壓、放大器電路增益調(diào)定的基礎(chǔ)上,0和90散射的熒光強度*,并要求變異系數(shù)為最?。?br /> 
  5、選定流速、測量細胞數(shù)、測量參數(shù)等,在同樣的工作條件下測量樣品和對照樣品;同時選擇計算機屏上數(shù)據(jù)的顯示方式,從而能直觀掌握測量進程;
 
  6、樣品測量完畢后,再用去離子水沖洗液流系統(tǒng);
 
  7、因為實驗數(shù)據(jù)已存入計算機硬盤(有的機器還備有光盤系統(tǒng),存貯量更大),因此可關(guān)閉氣體、測量裝置,而單獨使用計算機進行數(shù)據(jù)處理;
 
  8、將所需結(jié)果打印出來。
 
  操作和使用中的注意事項
 
  1、光電倍增管要求穩(wěn)定的工作條件,暴露的較強的光線下以后,需要較長時間的“暗適應(yīng)”以消除或降低部分暗電流本底才能工作;另外還要注意磁屏蔽;
 
  2、光源不得在短時間內(nèi)(一般要1h左右)關(guān)上又打開;使用光源必須預熱并注意冷卻系統(tǒng)工作是否正常;
 
  3、液流系統(tǒng)必需隨時保持液流暢通,避免氣泡栓塞,所使用的鞘流液使用前要經(jīng)過過濾、消毒;
 
  4、注意根據(jù)測量對象的變換選用合適的濾片系統(tǒng)、放大器的類型等;
 
  5、特別強調(diào)每次測量都需要對照組。

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