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分光光度法是在特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)光的吸收度，對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析。常用的波長(zhǎng)范圍為：(1)200～380nm的紫外光區(qū)，(2)380～780nm的可見光區(qū)，(3)2.5～25μm(按波數(shù)計(jì)為4000cm<-1>～400cm<-1>)的紅外光區(qū)。所用儀器為紫外分光光度計(jì)、可見光分光光度計(jì)(或比色計(jì))、紅外分光光度計(jì)或原子吸收分光光度計(jì)
可見分光光度計(jì)測(cè)量范圍一般包括波長(zhǎng)范圍為380~780 nm的可見光區(qū)和波長(zhǎng)范圍為200～380 nm的紫外光區(qū)。不同的光源都有其*的發(fā)射光譜，因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源。
可見分光光度計(jì)可應(yīng)用于核酸的定量、蛋白質(zhì)的直接定量、細(xì)菌細(xì)胞密度測(cè)量等。
核酸的定量
核酸的定量是分光光度計(jì)使用頻率最高的功能。可以定量溶于緩沖液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波長(zhǎng)260 nm。每種核酸的分子構(gòu)成不一，因此其換算系數(shù)不同。定量不同類型的核酸，事先要選擇對(duì)應(yīng)的系數(shù)。
蛋白質(zhì)的直接定量(UV法)
這種方法是在280nm波長(zhǎng)，直接測(cè)試蛋白。選擇Warburg 公式，光度計(jì)可以直接顯示出樣品的濃度，或者是選擇相應(yīng)的換算方法，將吸光值轉(zhuǎn)換為樣品濃度。蛋白質(zhì)測(cè)定過(guò)程非常簡(jiǎn)單，先測(cè)試空白液，然后直接測(cè)試蛋白質(zhì)。
細(xì)菌細(xì)胞密度(OD 600)
實(shí)驗(yàn)室確定細(xì)菌生長(zhǎng)密度和生長(zhǎng)期，多根據(jù)經(jīng)驗(yàn)和目測(cè)推斷細(xì)菌的生長(zhǎng)密度。在遇到要求較高的實(shí)驗(yàn)，需要采用分光光度計(jì)準(zhǔn)確測(cè)定細(xì)菌細(xì)胞密度。OD600是追蹤液體培養(yǎng)物中微生物生長(zhǎng)的標(biāo)準(zhǔn)方法。
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