2D-Gel實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)
復(fù)雜蛋白質(zhì)樣品的高效分離是提高M(jìn)S對蛋白質(zhì)鑒定覆蓋度的重要因素。2D-Gel技術(shù)是依據(jù)蛋白質(zhì)等電點(diǎn)(iso-electric point)和分子量的差異,通過等電聚焦(IEF)和SDS-PAGE的二維分離,不同性質(zhì)的蛋白質(zhì)以點(diǎn)狀的形式(spot)分布在凝膠上;
樣品通過2D-Gel分離后,每個(gè)點(diǎn)上的蛋白質(zhì)復(fù)雜度急劇降低。因此,凝膠上的蛋白質(zhì)酶解后,不需要再進(jìn)行LC分離,可以直接進(jìn)行MALDI-TOF MS分析,從而縮短實(shí)驗(yàn)周期和降低MS測試費(fèi)用;
2D-Gel技術(shù)幾乎兼容所以來源的蛋白質(zhì)樣品(細(xì)胞、組織、體液等);
2D-Gel結(jié)合MALDI-TOF MS,主要用于差異蛋白質(zhì)組分析。
2D-Gel實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)技術(shù)路線:

2D-Gel實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)實(shí)驗(yàn)流程:
1.蛋白質(zhì)提取及定量;
2.蛋白質(zhì)分別進(jìn)行2D-Gel電泳及染色;
3.掃描圖片,用軟件對圖像進(jìn)行分析,尋找差異點(diǎn);
4.切割差異點(diǎn),Trypsin酶解,提取肽段,MALDI-TOF MS完成蛋白質(zhì)鑒定;
5.數(shù)據(jù)篩選,挑選蛋白質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證(Western blot等)。