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2D-DIGE實驗外包服務(wù)

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2D-DIGE實驗外包服務(wù)

 DIGE — 雙向熒光差異凝膠電泳(Two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis,2D-DIGE),是在傳統(tǒng)雙向電泳的基礎(chǔ)上發(fā)展而來的新型蛋白質(zhì)組學(xué)定量技術(shù),其分離蛋白質(zhì)混合的原理與雙向電泳是*的,主要利用蛋白質(zhì)的等電點和分子量的差異來分離蛋白質(zhì)混合物,同時應(yīng)用熒光染料的靈敏度及內(nèi)標(biāo)的使用等技術(shù),使其在定量蛋白質(zhì)組學(xué)的研究中效果明顯優(yōu)于傳統(tǒng)雙向電泳。
      DIGE使用的熒光染料有Cy2, Cy3和Cy5,它們能與蛋白質(zhì)的賴氨酸側(cè)鏈氨基反應(yīng)而使蛋白質(zhì)被標(biāo)記,被標(biāo)記蛋白質(zhì)的等電點和分子量幾乎不受影響,等量混合標(biāo)記好的蛋白質(zhì)后進(jìn)行雙向電泳,不同凝膠之間可以通過cy2內(nèi)標(biāo)匹配,消除凝膠之間的差異,蛋白質(zhì)表達(dá)量的變化則通過cy3和cy5不同熒光的強(qiáng)度來體現(xiàn)。
 
二、
2D-DIGE實驗外包服務(wù)與常規(guī)雙向電泳后,銀染或考染膠相比,DIGE具有以下優(yōu)勢: 
     1、靈敏度高,zui低可檢測到125pg的蛋白質(zhì);
     2、高效性,同一塊凝膠上可以電泳兩個樣品,減輕了工作量;
     3、線性范圍更廣,動態(tài)范圍高達(dá)10-5;
     4、定量精確, 采用內(nèi)標(biāo)消除了凝膠與凝膠之間的實驗誤差,顯著提高了實驗的精確度和可重復(fù)性;
     5、統(tǒng)計學(xué)分析,ImageMaster7.0(DIGE)軟件可以得到統(tǒng)計學(xué)可信的結(jié)果,降低了操作者之間的偏差。


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